Развитие проблемы гормоноподобных веществ в лечебных грязях
С. К. Лесной. "Лечение гипоовариальных расстройств грязями и эндокринными препаратами"
"Медгиз", М., 1950 г. Публикуется с некоторыми сокращениями OCR Detskiysad.Ru
Первыми ископаемыми, которые были испытаны на присутствие эетрогевных веществ, оказались так называемые битумы, представляющие собой продукты давно отмерших животных и растений, образовавшиеся главным образом из остатков жира и воска. Битумы представляют собой твердые, жидкие и газообразные соединения, содержащие углерод, водород, почти всегда кислород, а также азот и серу. Исследованию подверглись наиболее известные из битумов, имеющие широкое техническое применение: нефть, бурый и каменный уголь, деготь, асфальт, а также лечебный торф. В 1932 г. появилось сообщение Ашгейма о нахождении эстрогенных веществ в необработанной нефти и ее продуктах, в буром и каменном угле, торфе и дегте. Уже прямая подкожная инъекция необработанной нефти в количестве 3,6 см3 вызывала у крыс полную течку. В общем на 1 кг необработанной нефти приходилось 2 000 м. е. эстрогенного вещества, на 1 кг кавказского нафталана - приблизительно 8 000 м. е., а на 1 кг некоторых асфальтов - 10 000 м. е. Оказалось, что действующее начало в большом количестве содержится в компонентах нефти с высокой точкой кипения (например, в нафталане). Из бурого и каменного угля, из каменноугольной смолы и торфа активные начала экстрагировались преимущественно спиртом, бензолом, ацетоном. При помощи различных методов экстракции, а также фракционированной перегонки удавалось значительно обогащать действующее начало. После фракционной перегонки при 200-250° и 20 мм давления вещества становились в три раза более действенными, чем исходный материал. При преобладании веществ, растворимых в воде, очищение производилось путем изменения концентрации водородных ионов. Из 1 кг бурого угля удавалось извлечь почти 400 м. е., из каменного угля - от 600 до 1 000 м. е., из каменноугольной смолы - 70 м. е. Полученные посредством экстракции бензолом и спиртом препараты из бурого угля содержали 1 600-8 000 м. е. на 1 кг. Из 79 кг торфа было получено 50 г темного ароматного масла, в 1 г которого содержалось 850 м. е. Таким образом, из 1 кг торфяной грязи удалось получить несколько более 500 м. е. Экстракты испытывались на различные биологические пробы, положительная реакция которых могла подтвердить биологическое тождество эстрогенных веществ, полученных из битумов, с фолликулярным гормоном яичника, с эстрогенным гормоном плаценты и мочи. Впрыскивания экстрактов кастрированным крольчихам вызывали полную регенерацию мышцы и слизистой оболочки матки... У кастрированных крольчих после вспрыскивания экстракта из грязи (или бурого угля) и последующего впрыскивания гормона желтого тела в слизистой оболочке матки развилась картина, характерная для псевдогравидарной фазы; это доказывало, что под действием экстракта слизистая матки прошла развитие пролиферационной фазы, без которой не мог бы проявить свое действие гормон желтого тела. Далее, после введения экстракта из грязи наблюдался рост грудных желез и сосков у инфантильных и кастрированных морских свинок, а также у нормальных взрослых самцов. Испытание экстракта из каменного угля дало у кастрированных мышей нарастание процента хромо-коричневых клеток в ганглиях матки (с 2,15 до 5,23%). Под действием того же экстракта, вводимого по 2,5 крысиной единицы ежедневно в течение 17 дней, у кастрированных молодых крыс задерживалось появление в передней доле гипофиза «клеток кастрации», которые обнаруживались у всех контрольных животных, не получивших экстракта. В связи с открытием гормоноподобных эстрогенных веществ в торфяных грязях в 1934 г. выступил с рядом статей Фохт (Vogt). Заглавия и содержание всех этих статей, реферированных во многих иностранных журналах, в основном одни и те же. Минеральная торфяная грязь противопоставлялась иловой грязи. По характеристике этого автора, торф является продуктом, получившимся в результате пропитывания гумифицирующихся растений минеральными источниками, тогда как ил - продукт каменистой, горной породы и никаких растительных остатков не содержит, а потому торф, кроме общего действия, специфически влияет на женскую половую сферу, тогда как «от ила мы не можем иметь никакого гормонального действия на женский организм». «Торф, а не ил, - заключал автор каждую из своих статей, - должен быть избранным методом лечения тех форм женских болезней, при которых имеются симптомы анатомической или функциональной недостаточности половой сферы». Такое мнение было бы справедливо по отношению к грязям вулканического происхождения. Что же касается иловой грязи наших лиманов, то она содержит вещества не только растительного, но и животного происхождения. Выяснено, что в процессе образования ила на дне озер веками скоплялись представители как флоры, так и фауны, развивавшиеся в водоеме в весеннее время, при слабой концентрации солей, и осаждавшиеся на дно озера после гибели от катастрофически высокой для них концентрации солей, создававшейся в связи с усыханием озера в жаркое время года. Об этом, например, свидетельствуют данные многих исследований сакской грязи. Так, еще при первом исследовании химического состава сакской грязи (1807) было установлено, что ил содержит соответствующие солончаковому грунту растения. Более поздний исследователь той же грязи, профессор Одесского лицея Гассгаген (1849), указывал, что в сакской грязи встречаются остатки животных и растений, находящиеся в состоянии разложения. При микроскопическом анализе ила Сакского озера Н. М. Кулагин (1886) отметил, кроме массы минеральных частиц, остатки водорослей, обломки раковин, остатки круглых червей. По исследованиям Вислоуха (1917), образование иловой грязи зависит от развития флоры и фауны: «Чем обильнее флора и фауна, тем больше образуется ила». По заключению С. А. Щукарева (1935), иловые грязи в значительной мере пополняются разнообразными остатками живых организмов, вносящих с собой органические вещества. Еще А. А. Вериго (1881) рассматривал иловую грязь как кладбище многочисленных поколений микроорганизмов, а по Б. В. Перфильеву (1832) число живых микроорганизмов в иловой грязи доходит до 9 млрд в 1 г. Таким образом, иловая грязь не может быть приравнена к грязи вулканического происхождения. Утверждение немецкого бальнеолога относительно исключительной эстрогенной активности торфяных грязей, которыми преимущественно располагает Германия, имели явно тенденциозно-рекламный характер. Первые фактические опровержения не обоснованных биологической проверкой утверждений относительно эстрогенной инактивности иловых грязей, которыми особенно богата наша страна, последовали, как и должно было ожидать, со стороны русских исследователей 1.
------------------------------------
1 Позднее было выяснено, что торф Пирмонта, которым лечил своих больных Фохт, даже уступал в эстрогенной активности многим иловым грязям.
------------------------------------
Еще до появления в печати статей Фохта А. Н. Егоров (Ленинград) в заседании Ленинградского акушерско-гинекологического общества от 15 ноября 1933 г. выступил с докладом относительно биологических свойств экстракта грязи Старорусского курорта, в которой он обнаружил свойства, присущие веществам, вызывающим течку и другие явления, приписываемые так называемому «половому гормону»1. Затем уже широко распространившееся мнение, не допускавшее возможности присутствия в иловых грязях эстрогенных веществ, было опровергнуто первым же нашим сообщением в печати относительно нахождения их в сакской иловой грязи, в результате специального исследования, предпринятого нами в лаборатории Государственного института экспериментальной эндокринологии в 1934 г.2. Исследованию была подвергнута лечебная грязь восточного бассейна Сакского озера, которая по последнему химическому анализу проф. Щукарева (1935) содержит 36% воды, 11% растворимых солей, 38,5% кристаллического скелета (частицы глинистые, гипс, карбонат кальция) и 14,5% коллоидального комплекса (тонко-глинистые частицы, сернистое железо); особенности сакской грязи: бедность водой, высокий удельный вес (1,6-1,7), малая теплоемкость, хорошая нагреваемость, черный цвет, зависящий от сернистого железа, богатство связанным азотом, высокая соленость, равная 11%, тогда как соленость грязи Одесского лимана 2,3%, а грязи Старорусского курорта - 1,5%. Мы применяли следующий метод получения вытяжек: нативную грязь слегка подкисляли НСl, разбавляли водой 100 см3 на 200 г грязи и экстрагировали эфиром (по 100-80 см3 шесть раз); эфир отгоняли, а остаток растворяли в 0,5% растворе Nа2СОз. Вытяжки испытывались на кастрированных мышах посредством биологической реакции. При первом опыте из 200 г грязи было получено 50 см3 вытяжки. После введения шести мышам по 1 см3 вытяжки течки не на-
--------------------------------------
1 См. протокол № 16 в Журнале акушерства и женских болезней, т. XLV, кн. I, 1934, стр. 67.
2 Сообщено на клинической конференции Государственного института экспериментальной эндокринологии 13/2 1935 г. и на конференции научных курортных советов курортов Евпатория и Саки 23/8 1935 г.
--------------------------------------
ступило ни у одной. При втором опыте из 400 г грязи получили 10 см3 вытяжки, так что эта вытяжка была в 10 раз более концентрированной, чем вытяжка, полученная при первом опыте. Каждой из шести мышей было введено по 1 см3 второй вытяжки, после чего у четырех наблюдалась полная картина течки, у пятой - вторая стадия (одни эпителиальные клетки), шестая осталась без изменения. На основании полученных данных можно было заключить, что 1 см3 такой вытяжки содержал не менее 1 м. е. вещества, действовавшего аналогично гормону, вызывающему течку. Мы не пытались исчислять эстрогенную активность сакской грязи в единицах на 1 кг ее веса, так как имели в виду позднее применить другие методы экстрагирования в расчете на более совершенное извлечение эстрогенных веществ. И действительно, результаты наших последующих исследований сакской грязи, как и следовало ожидать, показали, что эстрогенная активность, исчисленная Г. К. Живатовым, по данным нашего первого исследования, в 25 м. е. на 1 кг грязи, была значительно преуменьшена. В 1936 г. появилась в печати работа Егорова «О содержании эстрогенных веществ в лечебной грязи Старорусского курорта». Методика приготовления вытяжек из иловой грязи была следующей: экстрагирование из нативной грязи эфиром (три раза); удаление эфира выпариванием на водяной бане; очистка получавшейся маслянистой зеленовато-бурой массы посредством растворения в эфире и этиловом спирте; фильтрация и выпаривание; растворение маслянистого гомогенного осадка в эфире, а затем прибавление физиологического раствора. Биологическая проба на кастрированных мышах показала наличие в экстракте из грязи вещества, обладающего способностью вызывать эстральные изменения подобно фолликулярному гормону. Это вещество сохраняло активность, будучи смешано с водой, но очень плохо переходило в водный раствор. Активнее получался экстракт, растворенный в персиковом масле. Под влиянием введения экстракта одновременно с наступлением эстральной фазы у кастрированных мышей матки становились сочными, увеличивались в размерах и резко отличались от маток кастрированных мышей, которым экстракт не вводился. В опыте на двух кастрированных крольчихах (весом около 2 кг) одна получала инъекции масляного раствора экстракта из грязи, а другая - такое же количество масла; в результате у первой матка была сочная, розовая и толщина ее в полтора раза превышала толщину матки крольчихи, которой было введено чистое масло. Тем самым подтверждалось действие на матку, подобное действию фолликулярного гормона. Допустив возможность перехода эстрогенного вещества в раствор минеральной воды, покрывающей слой грязи, Егоров испытывал эфирную вытяжку из этой воды, растворенную в масле. Опыт дал отрицательный результат. Такой же результат был получен нами при испытании рапы Сакокого озера на содержание эстрогенных веществ (1936). В 1937 г. одесские авторы Г. К. Живатов и Л. С. Державина опубликовали результаты своих опытов по определению гормоноподобных веществ в грязи одесского Куяльницкого лимана. Они применяли следующую методику. Нативную грязь в количестве 1 кг (рН = около 8) высушивали при 50° и растирали в порошок (627 г), который экстрагировали равным количеством эфира (5 раз по 2 часа). После отгонки эфира получали густой зеленый вазелиноподобный осадок. После повторных промываний этого осадка спиртом и эфиром, фильтрации и перегонки получали вещество (в количестве 1,67 г) бурого цвета, застывавшее при температуре ниже 16-17°; это вещество («гормонол») растворяли в персиковом масле, испытывали и стандартизировали на кастрированных мышах. Оказалось, что 1 м. е. содержалась в 0,4 гормонола. Таким образом, из 1 кг нативной грязи удалось извлечь 50 м. е. эстрогенного, фолликулиноподобного вещества. С. М. Павленко и 3. С. Зайцева (1937) на основании многократных определений обнаружили в торфе курорта «Краинка» наличие эстрогенных веществ приблизительно в количестве 100 м. е. на 1 кг цельного торфа. Твердую и жидкую часть торфа они испытывали отдельно. Отжатый торфяной раствор выпаривали досуха и сухой остаток многократно экстрагировали липоидорастворяющими жидкостями при слабокислой реакции; затем экстракт переводили в прованское масло, а липоидные растворители полностью отгоняли. Твердую торфяную массу экстрагировали также липоидорастворяющими жидкостями, после чего полученный экстракт переводили в масло. Оказалось, что как твердая, так и жидкая часть торфа содержит большое количество эстрогенных веществ. Экстракты из твердой части торфа обладают высокой токсичностью, по предположению авторов, в связи со значительным содержанием фенолов. Вследствие того что воды, полученные после промывки твердых частиц торфа, слабо подкисленные (на холоду), содержали эстрогенные вещества, авторы высказали предположение, что эти вещества связаны с твердой массой торфа весьма непрочно. Последующими исследованиями Павленко и Зайцева выяснили некоторые свойства эстрогенных веществ краинского и подмосковных торфов. Оказалось, что после выветривания краинского торфа в течение 30 дней количество эстрогенных веществ оставалось неизменным. Не вызывало также изменений нагревание как торфа (до 150° в течение 2, 4 и 6 часов), так и масляных экстрактов (до 100-150° в течение 30 минут). Интересные результаты получены в опытах по вымыванию эстрогенных веществ. Торф и двукратный объем слабо подкисленной дестиллированной воды (по весу) в течение 2 часов взбалтывали, после чего жидкость отжимали на ручном прессе. Такой процесс последовательно производили четыре раза. В первой вытяжке было обнаружено 60% эстрогенных веществ, во второй - 30-35 %, в третьей - 5-10 %. В четвертой вытяжке эстрогенные вещества определить не удавалось. На основании этих результатов Павленко и Зайцева делают вывод, что в торфе происходит непрерывное образование и накопление эстрогенных веществ, что вследствие легкой вымываемости их из торфа можно испытать с лечебными целями ванны из торфяной жидкости и что необходима разработка рациональных методов транспортировки, хранения и использования торфяной грязи, обеспечивающих минимальную потерю эстрогенных веществ.
В растворах грязи озера Горького также обнаружены эстрогенные вещества, подвергнутые биологической проверке в лаборатории Института эндокринологии по инициативе А. Г. Кана. В 1939 г. из Государственного центрального института курортологии вышла работа Б. М. Соловьева и Л. М. Кейлис «Выделение биоколлоидных концентратов гормоноподобных веществ из лечебной грязи и нафталана», опубликованная на отчетной сессии института (7-11/III 1939 г.)- Авторы сообщили о результатах исследований по определению наличия эстрогенных веществ в некоторых лечебных грязях СССР. Исследовались иловые грязи морского происхождения - Одесского лимана и Чокракского озера, грязь континентальных озер Тамбукая и Бердянск и торфяная грязь Подмосковного бассейна. На основании опытов, проведенных И. С. Красниковой, выяснилось наличие эстрогенных веществ как в гидролизате одесской грязи, так и в остатке грязи. Эти вещества извлекали эфиром из омыленного раствора чокракской грязи. В опытах с диализом как чокракской, так и одесской грязи эстрогенные вещества не диализировались через коллодийную мембрану и сохранялись в грязевой массе. Опыты с механическим разделением сухой диализированной грязи на две фракции ( < 0,25 мм и <0,1 мм) показали наличие эстрогенных веществ в обеих фракциях. После промывки грязей водопроводной водой эстрогенные вещества сохранялись в грязевой массе. При экстракции хлороформом выпаренной резко щелочной одесской грязи получили очень малое количество сырого масла. Колориметрическая реакция оказалась отрицательной, вероятно, в результате экстракции при высоком рН. Обратило на себя внимание то, что после предварительного гидролиза грязи обычно удавалось извлекать из нее эстрогенных веществ больше, чем без гидролиза. Для определения эстрогенных веществ пользовались цветной реакцией и биологическим контролем на инфантильных мышах. В результате ряда опытов оказалось, что из 1 кг нативной одесской грязи можно извлечь 50 м. е. инф. (1) эстрогенной субстанции, а после гидролиза - 250 м. е. инф.; из чокракской грязи, подвергнутой гидролизу, извлекали в среднем 30 м. е. инф.; из тамбуканской грязи добывали в среднем 50 м. е. инф.; из бердянской грязи, подвергнутой гидролизу, - всего лишь 15 м. е. инф.; из торфяной грязи Подмосковного бассейна извлекали 50 м. е. инф., а после гидролиза - 100 м. е. инф. на 1 кг нативной грязи.
------------------------------------
1 Инфантильных. Определение эстрогенной активности на инфантильных мышах технически проще, так как животных не нужно предварительно кастрировать, однако на кастрированных мышах определение точнее, так как животных можно предварительно проверить по стандарту.
------------------------------------
Чрезвычайно большое количество эстрогенных веществ удалось извлечь из нафталана (Азербайджан), представляющего собой особый вид нефти и состоящего из чистых масляных погонов без содержания бензина, керосина и парафина. Из 1 кг натурального нафталана (серия 495) удавалось извлечь в среднем 31 250 м. е. инф. эстрогенных веществ. Методику выделения эстрогенных веществ авторы основывали на принципе различной растворимости фолликулярного гормона в отдельных органических растворителях, на его поведении как лактона, на значении СО и ОН-групп для проявления специфического действия, на его отношении к растительным маслам, чувствительности к перекисям, способности к образованию коллоидных растворов-органозолей.
М. И. Эпштейн опубликовал в 1940 г. статью об эстрогенном факторе в лечебных грязях Славянского курорта. Из 1 кг грязи посредством ацетона исследователю удалось извлечь 375 м. е. (1939). В 1939-1940 гг. нами совместно с Н. М. Руденко и М. П. Даниловой предпринято было в лабораториях Государственного института экспериментальной эндокринологии повторное исследование грязи Сакского озера в целях возможно более точного определения ее эстрогенной активности. Одновременно такому же исследованию подвергнута была до того еще в этом отношении не исследованная грязь Мойнакского озера, которой лечат больных евпаторийского курорта. При выборе метода выделения эстрогенных веществ из сакской и мойнакской грязи мы учли имевшиеся в литературе указания относительно способов выделения эстрогенных веществ из органов, тканей и жидкостей, а также продуктов животного и растительного происхождения. Обычно для выделения эстрогенных веществ пользуются различными органическими растворителями, обладающими свойством практически не смешиваться с водой, например, хлороформом, бензолом, эфиром и т. п., или хорошо смешивающимися с водой, например, ацетоном, алкоголем и др. Для экстракции фолликулина из мочи применяли этиловый эфир или хлороформ. Кристаллический фолликулярный гормон в алкоголе, ацетоне и хлороформе растворяется очень легко, в этиловом эфире труднее и очень трудно растворим в петролейном эфире. Бензольную, хлороформную и эфирную экстракции наиболее широко применяют по отношению к жидким веществам - моче, околоплодным водам. Из таких материалов, как органы, ткани, кровь, кал, торф, эстрогенные вещества чаще экстрагируют ацетоном или алкоголем (т. е. теми растворителями, которые легко смешиваются с водой) с последующим извлечением эфиром. В дальнейшем полученные первичные концентраты обрабатывают путем перевода их в кислую или щелочную среду для освобождения эстрогенных веществ от нежелательных сопутствующих примесей. Некоторые пользуются экстракцией эфиром из предварительно высушенного материала.
Авторы, публиковавшие данные относительно извлечения эстрогенных веществ из грязи, к сожалению, не давали подробного описания методики экстрагирования. Мы подробно излагаем примененные нами методы. Сначала производилась экстракция хлороформом. В колбу емкостью 2 л брали навеску грязи в 500 г и добавляли 750 мл дестиллированной воды; к смеси прибавляли 250 мл хлороформа. Экстракцию производили при нагревании на водяной ванне в продолжение 5 часов, причем пары хлороформа конденсировались в шариковом холодильнике. После отделения хлороформного экстракта фильтрованием через складчатый фильтр из остатка производили экстракцию новой порцией хлороформа в количестве 200 мл. Собранные хлороформные экстракты упаривали, остаток экстрагировали 2-3 раза 30 мл этилового эфира (без перекисей), эфир отгоняли, а остаток растворяли в 5 мл дестиллировлнной воды, подщелоченной раствором едкого натра до рН = 8,0-8,2 (тимолблау). Полученный раствор испытывали биологически. Одновремено проводили хлороформную экстракцию с гидролизом, для чего к смеси грязи с дестиллированной водой прибавляли 30 мл химически чистой серной кислоты (до посинения красной бумажки конго). Затем прибавляли хлороформ и экстрагировали по вышеописанному способу. Ввиду того что при повторной экстракции грязи с серной кислотой хлороформ отделялся с трудом, приходилось дополнительно производить экстракцию этиловым алкоголем. Затем хлороформные и спиртовые экстракты упаривали и нейтрализовали 2% раствором едкого натра до рН = 6,0-6,5, после чего производили экстракцию эфиром; после отгонки эфира остаток растворяли в подщелоченной дестиллированной воде и испытывали биологически. Вследствие возникших затруднений в разделении водного, грязевого и хлороформного слоев мы перешли в дальнейшем на экстракцию этиловым алкоголем. При этом мы учитывали, что, с одной стороны, в алкоголе, особенно горячем, при концентрации 80° и выше, эстрогенные вещества легко растворимы, а с другой - алкоголь как вещество, хорошо смешивающееся с водой, является по отношению к грязи наиболее удобным экстрагентом. Экстракцию этиловым алкоголем мы производили следующим образом. В эрленмейеровскую колбу емкостью 1 л брали 150-200 г грязи, предварительно хорошо размешанной. Содержимое колбы заливали 300-400 мл (2 объемами) 96° этилового алкоголя, тщательно размешивали и подвергали экстракции на кипящей водяной бане с обратным холодильником (шариковым) в течение 2 часов. После охлаждения прозрачной желтоокрашейный раствор алкоголя декантировали, а остаток второй раз заливали 150-200 мл (1 объем) 96° алкоголя и подвергали второй экстракции, также в течение 2 часов. Второй алкогольный раствор присоединяли к первому, а осадок в третий раз заливали 150-200 мл 96° алкоголя и также экстрагировали на водяной бане в течение 2 часов. Третий экстракт, светложелтого цвета, отделяли от осадка фильтрованием. Собранные вместе три спиртовых раствора отгоняли под вакуумом досуха. Сухой осадок экстрагировали небольшими порциями по 20-30 мл 5-6 раз серным эфиром, свободным от перекисей. Эфирный раствор отфильтровывали и удаляли отгонкой эфира. Получавшийся сухой остаток растворяли в оливковом масле. Параллельно с экстракцией алкоголем проведена была аналогичная экстракция при одновременном гидролизе крепкой концентрированной кислотой. Для этой цели в колбу с навеской грязи (150-200 г) и двойным объемом алкоголя прибавляли 8-10 мл химически чистой серной кислоты до посинения красной бумажки конго. Затем повторяли вторую и третью экстракцию, каждую в течение 2 часов, при нагревании на водяной бане. Собранный вместе спиртовой раствор доводили 30% раствором NaOH до красной окраски лакмуса и отсутствия окраски по конго. Затем раствор упаривали под вакуумом досуха и остаток экстрагировали серным эфиром. Сухой остаток после эфира растворяли в 1-2 мл оливкового масла. Биологическое испытание проводилось на кастрированных мышах в отделе фармакологии института эндокринологии совместно со старшим научным сотрудником М. П. Даниловой. Белым мышам весом 18-20 г, у которых полтора месяца назад были удалены яичники, вводили под кожу однократно масляные растворы экстрактов в объеме 0,2 мл. На третий день после введения брали ежедневно два раза на предметное стекло вагинальное содержимое посредством промывания влагалища, окрашивали раствором метиленовой синьки и исследовали под микроскопом. Результаты учитывали по картинам, характерным для различных степеней течки. При биологическом испытании экстрактов каждую пробу ставили из расчета на какое-то определенное количество мышиных единиц в 1 кг грязи. В случае отрицательного результата на предполагавшуюся активность ставили следующую пробу из расчета на меньшее количество мышиных единиц, а в случае положительного результата первой пробы ставили новую из расчета на содержание большего количества мышиных единиц. Количественное определение эстрогенных веществ было произведено в двух образцах грязи восточного бассейна Сакского озера. Первый образец был взят осенью 1939 г. (9/IX) с целины из слоя на глубине от 5 до 25 см при концентрации рапы, равной 12,1° по Боме. Второй образец был взят зимой 1939 г. (2/XII) с целины после снятия гипсовой корки из слоя на глубине от 5 до 25 см при, концентрации рапы, равной 9° по Боме. Оба образца сохранялись в рефрижераторе при постоянной температуре минус 4°. Предварительно в обоих образцах грязи было определено содержание сухого остатка. Оказалось, что грязь первого образца содержала 65,1% сухого остатка, а грязь второго образца - 63,2% сухого остатка... Что касается определения эстрогенных веществ в мойнакской грязи 1, то оно было произведено на двух образцах грязи, из которых первый был взят осенью 1939 г. (8/IX) из третьего бассейна, а второй прислан из Мойнак в Москву в начале января 1940 г. Оба образца также хранились в рефрижераторе при постоянной температуре минус 4°.
Содержание влаги перед исследованием в первом образце равнялось 34,4%, а во втором образце - 38,6%. Выделение эстрогенных веществ из мойнакской грязи производили по описанному выше методу экстракции этиловым алкоголем без гидролиза и с гидролизом. ... На основании полученных нами результатов исследований сакской и мойнакской иловой грязи оказалось, что и та, и другая содержат эстрогенные вещества, причем из 1 кг сухой сакской грязи удалось получить максимально 240 м. е., а из 1 кг сухой мойнакской грязи - 100 м. е. Далее выяснено, что такое содержание эстрогенных веществ свойственно не всем образцам той и другой грязи. Исследование грязи, присланной из Сак и из Мойнак зимой 1940 г., показало значительно меньшее содержание эстрогенных веществ, равное 40 м. е. на 1 кг сухой грязи как сакской, так и мойнакской.
Невидимому, содержание в грязи эстрогенных веществ зависит от времени года и связанных с ним изменений в характере биологических процессов, протекающих в озере, от изменений в концентрации рапы, а может быть, и от других, еще не выясненных факторов, влияющих на био-физико-химическое состояние озера и грязевой массы. Количественные колебания эстрогенной активности в различных образцах грязи одного и того же месторождения отмечали и другие исследователи.
При исследовании торфяной пирмонтской грязи выяснилось, что в свежевынутой грязи содержание эстро-
-----------------------------------
1. По исследованиям проф. В. А. Гемилиана (1906-1907), между сакской и мойнакской грязью по содержанию органических веществ нет существенной разницы («О составе и свойствах целебных средств крымских лиманов», СПБ, 1909).
-----------------------------------
генных веществ гораздо больше (25-50 м. е. на 1 кг сухой грязи), чем в грязи, подвергавшейся некоторое время выветриванию в штабелях (10-11 м. е.). Однако выветривание краинского торфа, по данным Павленко и Зайцевой, не снижало содержания эстрогенных веществ. Эти авторы высказали предположение, что колебания количества эстрогенных веществ в грязи озера зависит от возможного перехода эстрогенных веществ из грязи в рапу при слабой концентрации и обратно. Переход эстрогенных веществ из рапы в грязь можно допустить при образовании высокой концентрации солей в рапе. Такое предположение позволительно высказать, если принять во внимание, что существует метод получения фолликулина из мочи, основанный на принципе высаливания, т. е. насыщения мочи солями (например, сернокислым аммонием), которые переводят фолликулин в осадок.
Что касается применения экстракции с кислотным гидролизом, то мы не получили от этого метода никаких преимуществ.
В одном случае мы не могли обнаружить эстротенной активности в спиртовом экстракте с гидролизом, тогда как в спиртовом экстракте без гидролиза из того же образца грязи эстрогенная активность равнялась 160 м. е. Когда мы образовавшиеся при указанной экстракции сухие остатки подвергли обработке бензолом, то в остатках после экстракции без гидролиза нам не удалось обнаружить эстрогенных веществ, тогда как в сухих остатках после экстракции с гидролизом эстрогенные вещества были найдены в количестве, равном 80 м. е. ... За период 1933-1938 гг. в зарубежной печати опубликовано было несколько сообщений относительно результатов исследований на эстрогенную активность лечебных грязей 20 месторождений. Из всех подвергавшихся испытанию торфяных, иловых и сапропелевых лечебных грязей удалось извлечь вещества, которые при биологической проверке давали реакции, свойственные женскому эстрогенному гормону. При этом обнаружились значительные колебания в отношении содержания такого рода гормоноподобных веществ в грязях различных месторождений. Так, максимальная эстрогенная активность, выраженная в мышиных единицах в 1 кг, по 9 месторождениям торфяных грязей определялась в пределах от 50 до 250 в высушенной грязи, от 500 до 800 в нативной грязи, по 8 месторождениям иловых грязей - от 15 до 200 в сухой грязи и от 100 до 500 в нативной грязи, по 2 месторождениям сапропелевых грязей - от 800 до 1 000 в высушенной грязи. В одном случае исследование грязи вулканического происхождения показало ничтожное содержание в ней эстрогенного вещества - 1/3 м. е. на 1 кг высушенной грязи. Интересно отметить, что при исследовании торфа одного из месторождений выяснилась значительная зависимость содержания эстрогенных веществ от внешних влияний; так, из свежевынутого торфа удавалось извлечь 50 м. е. эстрогенных веществ на 1 кг сухой грязи, тогда как из торфа, подвергавшегося выветриванию в штабелях, извлекалось только 10 м. е. Перехожу к сравнительному рассмотрению результатов, полученных при вышеизложенных исследованиях лечебных грязей на эстрогенную активность. Из опубликованных в печати данных видно, что за период 1932-1940 гг. было подвергнуто испытанию на содержание зстрогенных веществ более 30 месторождений торфяных, иловых и сапропелевых лечебных грязей, а также грязь вулканического происхождения. Присутствие веществ, действующих подобно женскому половому гормону, обнаружено во всех торфяных, иловых и сапропелевых лечебных грязях. Наибольшее количество эстрогенных веществ удалось извлечь из сапропелевых грязей (1 000 м. е. на 1 кг). Из торфяных грязей исследователи иногда извлекали большее количество эстрогенных веществ (до 800 м. е. на 1 кг), чем из иловых грязей (до 375-500 м. е. на 1 кг). Однако из некоторых иловых грязей удавалось экстрагировать большее количество эстрогенных веществ (например, из одесской - 250 м. е., из сакской - 240 м. е. на 1 кг), чем из некоторых торфяных грязей. Что же касается грязи вулканического происхождения, в которой органические примеси в основном подверглись сгоранию, то содержание в ней эстрогенных веществ оказалось столь незначительным, что практически нельзя говорить об ее эстрогенной активности. Необходимо иметь в виду, что сравнение количественного содержания в грязях эстрогенных веществ может иметь только условный характер, главным образом из-за неоднородности применявшейся техники экстрагирования, недостаточно подробное описание которой затрудняет постановку проверочных исследований. Необходимо принять во внимание также то, что одни авторы (большинство) исчисляли количество эстрогенных веществ по отношению к весу сухой грязи, тогда как другие - по отношению к весу нативной грязи, а потому цифры последних при перечислении на вес сухой грязи, естественно, должны быть увеличены. Наконец, необходимо отметить, что некоторые авторы производили стандартизацию полученных из грязей концентратов на инфантильных мышах (Соловьев и Кейлис), тогда как другие (подавляющее большинство) пользовались для этой цели кастрированными мышами. Выяснившиеся при нашем исследовании сакской и мойнакской грязи значительные колебания эстрогеннои активности в различных образцах каждой грязи при одинаковой методике экстрагирования выдвигают необходимость определения количества эстрогенных веществ в ряде образцов грязи, взятых из различных мест ее залегания, в разное время года, при различной концентрации рапы, из различных бассейнов и мест, в которых грязь сохраняется. В результате такого диференцированного исследования грязей можно будет выяснить причины, влияющие как на обогащение, так и на обеднение грязевой массы эстрогенными веществами, а главное ту грязь, у которой будет установлена максимальная эстрогенная активность, можно будет использовать на лечебные процедуры для гипофункциональных гинекологических больных. В связи с открытием в лечебных грязях гормоноподобных эстрогенных веществ возникло несколько новых вопросов, разрешения которых пытались достигнуть посредством теоретических обоснований или при помощи специальных исследований.
Один из этих вопросов, касавшийся выяснения источников происхождения эстрогенных,веществ в лечебных грязях и вообще в битумах, не вызвал никаких разногласий. Все единогласно относили к таким источникам давно отмерших представителей растительного и животного мира. Неразрешенным оставался смежный вопрос: сохранились ли эти гормоноподобные вещества с незапамятных времен до нашего времени в консервированном состоянии как продукты обмена погибших растений и животных или же эти вещества образовались в результате процессов гумификации из животных и растительных остатков? Одни допускали возможность сохранения эстрогенных веществ в растительных и животных материалах в течение тысяч и миллионов лет, не исключая вместе с тем возможности образования этих веществ при естественных процессах, приведших исходные материалы в состояние нефти, угля, торфа и т. п. Другие предполагали, что эстрогенные вещества в ископаемых содержатся как производные обмена веществ погибшей растительности. Возраст некоторых месторождений каменного угля определяют более чем в 100 миллионов лет. Начало образования некоторых видов торфа относят к концу ледникового периода. Если учесть, какие количества каменного угля, нефти, торфа и т. п. потребляет человечество для получения тепла и энергии, то количество эстрогенных веществ, сгорающих при этом, придется определять многими тоннами. Егоров считал маловероятным, чтобы эстрогенные вещества, образовавшись в отдаленные времена, сохранялись в течение целых геологических периодов; по его мнению, скорее следует думать, что они образуются в грязях в результате тех химических процессов, которые обусловлены жизнедеятельностью и распадом многочисленной микрофлоры. Павленко и Зайцева на основании результатов опытов по вымыванию эстрогенных веществ из краинского и подмосковного торфа пришли к заключение, что в торфе происходит непрерывное образование и накопление эстрогенных веществ, непрочно связанных с твердой массой торфа. Таким образом, если нет сомнения в том, что источниками происхождения эстрогенных веществ в грязях и других битумах являются вымершие представители животного и растительного мира, то относительно времени образования этих эстрогенных соединений можно говорить только предположительно. По отношению к таким ископаемым, как каменный уголь, вернее предположить, что эстрогенные соединения остались законсервированными с давних времен его образования, по отношению же к иловым грязям скорее допустимо, что эстрогенные вещества в связи с непрерывностью течения процессов грязеобразования не прекращают синтезироваться из продуктов обмена и разложения населяющих водоем животных и растительных организмов. Следующий вопрос касается выяснения химической природы и молекулярного строения эстрогенных веществ, содержащихся в лечебных грязях. Высказывалось предположение, что такие вещества следует отнести к той же группе химических соединений, к какой относятся половые гормоны, что подобно последним эти вещества являются производными холестерина - стероидами и что холестерин представлял собой материнскую субстанцию для их синтеза. Указывалось, что даже вне жизненных процессов холестерин может превратиться в вещество с эстрогенным действием. Учитывали также, что холестерин весьма распространен в природе, являясь составной частью животных и растительных клеток и тканей, и что в этих клетках и тканях, наряду с другими видами обмена, происходит также стериновый или стероидный обмен.
Если принять во внимание, что лечебные грязи содержат продукты животного и растительного происхождения, то естественно допустить, что в своей органической составной части грязи должны содержать холестерин и его производные. Такое предположение нашло подтверждение в нахождении в некоторых торфяных, иловых и сапропелевых грязях стеролей (стеринов) - холестероля, фитостероля, эргостероля. Известно, что эргостерин, витамин D и неоэргостерин обладают эстрогенной активностью; особенно активными считают нафтодериваты эргостерина. Присутствие в грязях эргостерина, относящегося, как известно, к стероидным гормонам, может придать грязям эстрогенную активность. Привлекает к себе внимание факт получения из эргостерина после его облучения витамина D2, или кальциферола, относящегося к эетрогенно активным стероидам. Этот результат облучения может по-новому объяснить значение солнечного нагрева грязи как метода, стимулирующего ее эстрогенную активность. Такой метод, как известно, сохранился с древности только у нас в Саках, Евпатории и Чокраке. Можно решить этот интересный вопрос посредством сравнительного изучения эстрогенной активности лечебной грязи (из так называемых грязевых медальонов) до и после нагрева солнечными лучами на открытом воздухе. Что касается молекулярного строения холестерина и его производных стероидов, в том числе половых гормонов, то, как было указано выше, характерным считается присутствие фенантреновой группы. И действительно, получаемые синтетически в реторте химика некоторые вещества, имеющие в своей молекуле фенантреновое ядро, обладают эстрогенным действием. Напомню также, что из растительных продуктов удалось получить вещество, подобное а-фолликулярному гормону, и вещество, подобное гидрату фолликулярного гормона.
Приведенных данных, пожалуй, было бы достаточно для вывода заключения о том, что эстрогенные соединения, содержащиеся в грязях (в битумах), по химическому строению должны быть тождественны половым гормонам, если бы не было известно, что эстрогенной активностью обладают также многие вещества, химическое строение которых не имеет сходства со строением половых гормонов. Выяснено, что производные антрацена также обладают течковым действием; при этом оказалось, что некоторые из соединений, полученных из каменноугольной смолы, кроме эстрогенного, имели еще канцерогенное действие, т. е. обладали свойством вызывать развитие экспериментального рака у животных. Оказалось, что фенантреновая структура молекулы вещества не обязательна для его эстрогенной активности. Выяснено, что эстрогенной активностью обладает полученный синтетически 1,2-диокси-1,2-ди-а-нафтил-аценафтен. Под действием 100 мг этого вещества крыса 40 дней находилась в состоянии течки, а у каплуна оперение изменялось так же, как под действием эстрона. Эсгрогенно активным оказалось и соединение дифенил-а-нафтилкарбинол. Наиболее простыми по своему строению веществами, обладающими течковым действием, оказались ди-р-гидрокеидифенил и р-гидроксипропиленфенол, названный анолом, который легко получается посредством щелочного гидролиза из эфирного масла анетола (анисового масла). 1 m анола давала течковый эффект, что по активности сближало его с эстроном.
В. И. Максимов и Н. Д. Ярцева (1937) в химической лаборатории Института экспериментальной физиологии и терапии производили синтез анола и его производных. Полученный ими полимер анола - полианол - оказался по действию на влагалище и на матку кастрированной крольчихи, а также на молочные железы морских свинок аналогичным фолликулярному гормону. Полианол, предоставленной мне Максимовым летом 1942 г. для поликлинического испытания, показал лечебную эффективность, приблизительно подобную эффективности фолликулина в 1 000 ед. в 1 см3. Из ряда полученных синтетических нестероидных эстрогенов наибольшую активность показали стильбэстрод и гексэстрол (наш синэстрол), вследствие чего они получили за последнее время широкое лечебное применение. Нашего опыта лечения этими препаратами мы коснемся ниже, в клиническом разделе.
Различное химическое строение многочисленных синтетических эстрогенно активных соединений, нестероидных эстрогенов опровергло признававшуюся до того закономерность зависимости их биологической действенности от химической структуры.
Что касается химической природы находящихся в грязях (в битумах) эстрогенных веществ, то следует считать еще не доказанным их химическое тождество с половыми гормонами; существует взгляд, что извлеченные из битумов эстрогенные вещества не имеют никакого отношения к группе фолликуляоного гормона. Таким образом, вопрос о химическом строении эстрогенных соединений, содержащихся в грязях (в битумах), приходится считать еще не решенным; он может быть разрешен только постановкой специальных химических исследований. Обнаружение в лечебных грязях эстрогенных веществ, с одной стороны, осветило биологические и химические особенности грязей, а с другой - открыло возможности для нового объяснения механизма специфического действия грязелечения на женский организм. Для доказательства существования такого механизма чрезвычайно важно было решить вопрос о возможности всасывания эстрогенных веществ через кожу. Уже давно установлено, что через неповрежденную кожу могут всасываться не только газы, но и вещества, растворяющие жиры и растворяющиеся жирами. Выяснено, что для проникновения нелетучих веществ через неповрежденную кожу до лимфатических и кровеносных сосудов необходимо, чтобы эти вещества растворялись в воде и липоидах; предрасполагающими условиями являются смачивание и пропитывание кожи водой и отсутствие воздушного пространства между раствором и кожей. Существует липоидная теория, по которой через кожу посредством осмоса проникают вещества, растворимые в жирах, лецитине, холестерине и т. п.; при этом чем больше растворимость вещества в липоидах, тем скорее и в большем количестве оно всасывается. Относительно проникновения половых гормонов через кожу и слизистую оболочку сделан ряд сообщений. Экспериментально доказано проникновение эстрогенного вещества через неповрежденную кожу. После смазывания растворенным в бензине кетогидроксиэстрином спинок кастрированных мышей без предварительного удаления шерсти у животных наступала течка. В доказательство всасывания кожей фолликулина приводятся результаты эксперимента на кастрированных мышах, у которых после втирания мази, содержащей фолликулин, в выбритую кожу спинки наблюдалась течка; чтобы вызвать течку перкутанно, нужна доза фолликулина, в 7 раз большая, чем при парэнтеральном введении. Что касается всасывания через неповрежденную кожу синтетических нестероидных эстрогенных веществ (стильбэстрола, синэстрола и др.), то установлено, что они подобно фолликулину проявляют активность при неркутанном применении (при накожной апликации), а также при интравагинальном введении. Проводились опыты на кастрированных мышах по всасыванию через кожу прогиноиа и экстракта из торфяной трязи. При этом, чтобы воспрепятствовать слизыванию вещества и попаданию его в организм через рот, на смазанную спинку животных наклеивали коллодийную повязку. В результате у животных возникала течка после наружного применения как прогинона, так и экстракта из грязи. Доказательством всасывания через кожу эстрогенной субстанции считали появление течки у кастрированной крысы после втирания в ее спинку алкогольно-бензольного экстракта торфяной грязи. Опыты по выяснению проникновения эстрогенных веществ из экстрактов грязи через неповрежденную кожу провели также Живатов и Державина (1937) с экстрактом из иловой грязи («гормонолом») одесского Куяльницкого лимана. В спинки четырех кастрированных мышей (весом 18-25 г) втирали экстракт из грязи по 0,2 г два раза в день, причем для устранения возможности попадания экстракта в желудочно-кишечный тракт мышей помещали в стеклянные сосуды, а место втирания у двух мышей заклеивали еще повязкой с прослойкой вощаной бумаги. У всех мышей на 3-й день в мазках обнаружена была стадия течки, перешедшая на 4-й день в метаэструс, а на 5-й - в диэструс. Таким образом, эстрогенные вещества могут проникать в организм через неповрежденную кожу не только в виде очищенных препаратов - гормонов, но и в виде неочищенных экстрактов из грязи как торфяной, так и иловой. В 1938 г. Г. К. Живатов и И. И. Землинская опубликовали результаты опыта по действию грязевых процедур на матку кастрированной самки. Этот опыт был поставлен аналогично тем экспериментам, которые раньше неоднократно ставились для испытания экстрактов из различных грязей на присутствие фолликулиноподобных веществ, В основном в опытах был использован известный тест на фолликулярный гормон. Одной из двух крольчих, подвергшихся кастрации за 6 недель до этого, прикладывали к оголенному животу грязевую лепешку, другой накладывали на то же место водяную грелку. Для контроля была взята третья крольчиха, некастрированная. Животные были приблизительно одинакового веса и величины, содержали животных в одинаковых условиях. Через 15 дней, в течение которых первые две крольчихи ежедневно получали процедуры, у всех трех животных была вскрыта брюшная полость... У кастрированной крольчихи, получавшей грелку, видна картина атрофических процессов в матке и рогах; у крольчихи, получавшей грязевые процедуры гениталии почти приближаются к гениталиям контрольной некастрированной крольчихи. Полученные данные исследователи рассматривают как доказательство того, что "неповрежденная кожа всасывает из грязи химические вещества типа фолликулина и что эти вещества являются активно действующими в балансе биохимических процессов организма". ...Павленко и Зайцева в результате изучения краинской торфяной грязи допускали возможность всасывания кожей эстрогенных веществ при грязелечебной процедуре и приписывали этому всасыванию значительную лечебную эффективность. В 1939 г. на первой республиканской конференции по нафталану сделаны были сообщения по поводу его эстрогенного действия. Такое действие получается в результате того, что эстрогенные вещества, содержащиеся в нафталане в значительной концентрации, легко всасываются через неповрежденные кожные покровы. А. А. Геодаков в опытах многократного смазывания нафталаном кожи кастрированных крольчих обнаружил в матке такие же изменения, какие обычно происходят под действием фолликулярного гормона. Р. А. Дыхно-Лейбзон из клиники проф. Ильина (Баку) сообщил о том, что при втирании нафталана в кожные покровы белой мыши, кастрированной или инфантильной, возникала течка и соответствовавшие ей изменения влагалищной стенки; размеры матки у таких животных становились больше, чем у контрольных; микроскопически отмечали гиперплазию слизистой. Таким образом, на основании приведенных исследований вопрос о возможности всасывания через неповрежденную кожу содержащихся в грязях эстрогенных веществ следует считать решенным в положительном смысле, а если всасывание эстрогенных веществ из грязевой массы происходит, то в результате его в женском организме могут наступить такие реактивные явления, какие обычно наблюдаются под действием эстрогенных препаратов. Для дальнейшего научения эстрогенного фактора лечебных грязей и доказательств всасывания эстрогенных веществ из грязевой массы можно было бы поставить опыты в двух направлениях: во-первых, путем сравнительного определения количественного содержания эстрогенных веществ в грязевой массе до ее лечебного использования и после него; во-вторых, посредством количественного определения эстрогенов у гипогенитальных женщин в моче (и в крови) до и после грязевых процедур. При первых опытах можно ожидать понижения эстрогенной активности в использованной грязи, а при вторых - повышения содержания эстрогенов после грязелечения. Следовало бы также заняться определением эстрогенной активности наших сапропелевых грязей. Этот вид грязи, как уже говорилось, обладает наивысшей эстрогенной активностью, однако нам пока ничего не известно об изучении в этом направлении отечественных сапропелей. Если принять во внимание, что наша страна богата не только иловыми месторождениями, но и торфяными, то надлежало бы расширить исследования и в отношении изучения эстрогенной активности торфа, что могло бы содействовать делу развития у нас курортов местного значения. Изучая гормоноподобные соединения в лечебных грязях, исследователи испытывали их на присутствие веществ, подобных по действию не только фолликулярному, но и другим половым гормонам. К таким изысканиям имелись бы предпосылки в известном свойстве стероидных половых гормонов переходить из одного соединения в другое под влиянием тех или иных реакций, если бы уже была доказана тождественность химического строения содержащихся в грязях эстрогенных веществ и фолликулярного гормона. Тем не менее исследования в этом направлении были предприняты. Живатов и Державина испытывали грязь одесского Куяльницкого лимана на присутствие вещества, подобного по действию гормону желтого тела. Для проведения теста на гормон использованы были крольчихи весом 1950-2470 г. Через 14 дней после кастрации три крольчихи получали в течение 8 дней фолликулин (по 40 м. е.), а затем эфирную вытяжку из грязи по 1 см3 в продолжение 7 дней. Секреторной фазы слизистой рогов матки у животных получить не удалось, а потому не было оснований для заключения относительно присутствия в исследованной грязи вещества, обладающего свойствами прогестерона. Далее, лечебные грязи испытывали также на содержание в них веществ, подобных по действию мужскому половому гормону. Об отрицательных результатах такого исследования иловой грязи Старорусского курорта сообщил в 1936 г. Егоров, которому ни введением цельного экстракта из грязи, ни введением экстракта, лишенного эстрогенного вещества, не удалось получить у кастрированных самцов биологическую реакцию, характерную для мужского полового гормона. В 1938 г. были опубликованы результаты исследования, предпринятого с целью определения в торфяной и сапропелевой грязи румынских курортов наличия субстанции, обладающей биологическими особенностями мужского полового гормона. Предпосылкой к такому исследованию были следующие факты: во-первых, наличие в грязях стеринов; во-вторых, обнаружение в мужских цветах плакучей ивы (Salix), а также в дрожжевых грибках (Saccharomycetes) вещества, подобного мужскому половому гормону; в-третьих, присутствие в торфяных залежах тычинок цветов различных деревьев (ивы, сосны, ореха и др.), причем часть зернышек тычинок сохранилась почти неизмененной. Исследование имело целью выяснить, подвергается ли разложению мужской половой гормон, содержащийся в этих частях растений, а также присоединяющийся к торфу от грибов, вегетирующих на поверхности его залежей. Экстрагирование проводилось по следующему методу: 15 кг торфяной грязи после предварительнной обработки кислотой около 10 часов кипятили с тройным объемом воды, затем фильтровали и выпаривали до объема 15 л; получавшуюся густую жидкость подвергали экстракции эфиром; экстракт в виде коричневой маслянистой жидкости растворяли оливковым маслом так, чтобы получилось 15 см3. Таким образом, 1 см3 масляного экстракта соответствовал 1 кг торфа. После впрыскивания экстракта в течение 4 дней (по 1 см3 два раза в день) в гребень каплуна гребень покраснел и увеличился на 20%, причем температура тела не изменилась. Повторное испытание экстракта производилось на рыбках-горчаках(Rhadens amarus) ; внутримышечно с помощью микрошприца вводили экстракт в количестве 1/800
дозы впрыскиваемой в гребень петуха. Все животные дали резко положительную реакцию в виде «брачного наряда». На основании этих опытов пришли к заключению, что в торфе некоторых месторождений имеются растворимые в воде и масле субстанции со свойствами мужского полового гормона. Количественно активность этого вещества не определялась, ввиду того что результаты такого определения имели бы лишь условный характер, так как отношения между органическими и неорганическими субстанциями в торфе колеблются в широких ораницах, особенно в подвергавшемся испытанию старом торфе; кроме того, возможно изменение состава торфа в зависимости от степени пропитывания его водой. Надо сказать, что специфичность для мужского полового гормона реакции на гребень петуха не подвергается сомнениям, тогда как реакция на рыбках-горчаках сомнительна, потому что удавалось вызывать «брачный наряд» у горчака интермедином, иохимбином, стрихнином, кантаридином, эрготином, холином, ацетилхолином и экстрактом из печени. Таким образом, относительно содержания в грязях веществ, подобных по действию мужскому половому гормону, на основании противоречивых результатов исследования грязей только двух месторождений нельзя еще сделать определенных заключений. Однако факт нахождения в торфе вещества, подобного по действию мужскому половому гормону (при методологически правильном проведении опыта), должен побудить к продолжению исследования грязей других месторождений в этом направлении. Если для поисков в лечебных грязях эстрогенных веществ, подобных по действию фолликулярному гормону, существовали определенные предпосылки, то для поисков в грязях веществ, действие которых было бы подобно действию каких-либо гипофизарных гормонов, мы таких предпосылок не имеем. Однако в печати были сообщения относительно испытания лечебных грязей на присутствие в них веществ, подобных по действию пролану и некоторым другим гипофизарным гормонам. Что касается веществ, подобных по действию гонадотропным гормонам передней доли гипофиза, то, как известно, они не имеют в природе широкого распространения; аналогов им по действию не обнаружено у представителей животного и растительного мира, входящих обычно в состав лечебных грязей. С другой стороны, известно также, что по отношению к внешним влияниям продан, химическая природа которого еще не вполне выяснена, отличается чрезвычайной чувствительностью и неустойчивостью. Мы не пытались искать проланоподобные вещества в эфирных вытяжках из нативной грязи Сакского озера, которые нами биологически испытывались на присутствие эстрогенных веществ, так как было ясно, что в процессе приготовления таких экстрактов проланоподобные вещества (даже если бы они содержались в грязях) не могли быть извлечены, потому что пролан в эфире нерастворим.
Понятно, что Живатову (1936) не удалось получить положительную биологическую реакцию на пролан при испытании эфирной вытяжки из грязи Куяльницкого лимана. Не получил Живатов такой реакции и после впрыскивания водной вытяжки, приготовленной из 1 кг нативной грязи, залитой 1 л дистиллированной воды, с последующим восьмичасовым встряхиванием смеси в специальном аппарате. Предполагая, что отрицательные результаты этих опытов могли зависеть от незначительной концентрации проланоподобных веществ в водном экстракте грязи, Живатов обратился к испытанию гипофизэктомированных лягушек на меланофорную реакцию, которую он рассматривал как биологическую пробу, чувствительную к незначительному количеству пролана. Такой взгляд на меланофорную реакцию Живатов основывал на том, что А. Э. Мандельштам и Э. М. Каплун, а также М. А. Дыхно получали у гипофизэктомированных лягушек резко положительную меланофорную реакцию после впрыскивания питуикрина А.
В результате опытов, проведенных Е. М. Гринфельдом, оказалось, что через 30-60 минут после впрыскивания в спинной лимфатический мешок 5 см3 водного экстракта из грязи посветлевшие после удаления гипофиза лягушки темнели; впрыскивание изотонического раствора поваренной соли контрольным гипофизэктомированным лягушкам не вызывало никакого изменения в окраске их покровов. По заключению Живатова, «эти опыты могут служить некоторым подтверждением наличия пролана в исследуемых грязях». Никак нельзя согласиться с таким заключением, основанным на представлении о каком-то сходстве специфической биологической активности пролана и питуикрина А. На самом деле, хотя питуикрин А представлял собой экстракт передней доли мозгового придатка, однако, по испытаниям в проверочном отделе Государственного института экспериментальной эндокринологии, питуикрин А никогда пролана не содержал и вообще не получил определенной стандартизации (К. Д. Саргин). Факт получения меланофорной реакции под действием питуикрина А можно объяснить тем, что при отсепаровке сырья для экстрагирования могли в какой-то мере попасть тканевые элементы промежуточной доли (pars intermedia) гипофиза, которой, как известно, преимущественно приписывают продуцирование пигментного меланофорного гормона. Мандельштам и Каплун после введения зеленым лягушкам пролана в дозах 25-50-100 м. е. также не могли отметить заметного влияния на окраску кожи лягушек. Аналогичные отрицательные результаты получались после инъекций проланола, добытого из мочи беременных. Эти данные являются подтверждением того, что меланофорная реакция ни в какой степени не обладает чувствительностью к пролану. М. М. Завадовский высказывается так: «Меланофоры амфибий едва ли могут быть рекомендованы в качестве теста на пролан, так как опыт нашей лаборатории очень четко говорит, что меланофоры реагируют на разнообразные реагенты». Так, в лаборатории экспериментальной биологии Московского зоопарка при постановке опытов на аксолотлях (у которых, как известно, после удаления гипофиза наступает посветление покровов) М. А. Воронцова получала различной степени восстановление окраски покровов под действием интраперитонеальных инъекций эмульсий из различных органов (эпифиза, мышцы, мозга и др.), а также различных органических веществ (фибрина крови, пептона, глюкозы) и неорганических (жидкости Рингера, раствора хлористого натра разных концентраций). Меланофорную реакцию удавалось вызывать даже некоторыми неспецифическими веществами, например, хинином, курарином, холином, паральдегидом и кофеином. Понижение температуры, влажность, темнота вызывают экспансию меланофор, тогда как повышение температуры, сухость, свет - контракцию меланофор. Таким образом, раздражители, вызывающие меланофорную реакцию у гипофизэктомированных аксолотлей, качественно нвспецифичны.
С другой стороны, в печати мы находим немало сообщений относительно того, что меланофорное вещество находили не только в гипофизе: его находили в печени, в зобной и щитовидной железах, в последе, Мандельштам и Каплун - в моче беременных и в околоплодных водах (при шестимесячной беременности), Консулов - в молозиве, А. М. Дыхно - в фолликулине.
Вышеизложенного достаточно, чтобы притти к заключению, что меланофорную реакцию нельзя считать специфичной для пролана и вообще для производных гипофиза. Механизм действия этого теста еще не выяснен. Возвращаясь к опытам Живатова и Гринфельда, мне кажется, что положительную меланофорную реакцию у гипофизэктомироваиных лягушек под действием водной вытяжки из одесской иловой грязи правильнее объяснить тем, что в испытывавшейся грязи имелись растворимые в воде вещества, вызывавшие эту реакцию. Можно ли согласиться с Живатовым, объясняющим положительную меланофорную реакцию тем, что «в водном экстракте грязи имеются проланоподобные вещества и меланофорно-гормоноподобные, т. е. гормоноподобные вещества типа гормонов передней, средней или задней доли гипофиза»? Конечно, нельзя. Допустив наличие в грязях проланоподобных веществ, Живатов совместно с Землинской поставили эксперимент, при помощи которого они считали возможным выяснить, проходят ли проланоподобные вещества из грязи через неповрежденную кожу. Результаты были опубликованы в 1938 г. Эксперимент был поставлен на 4 половозрелых, весом приблизительно 2,5 кг крольчихах, которым предварительно за 7-9 недель была произведена аутотрансплантация яичников в переднюю камеру глаза. Две крольчихи получали на живот, предварительно оголенный от шерсти выщипыванием, грязевые лепешки размером 12 X 15 см, толщиной 1,5-2 см, нагретые от 40 до 46°, по 30 минут ежедневно, с отдыхом на 6-й день. Чтобы грязь не остывала, поверх лепешки накладывали резиновую грелку с водой температурой 50-55°. На 15-й день опыта, после 12 таких грязевых процедур, у одной крольчихи появилась резкая гиперемия пересаженного яичника, через сутки образовалось corpus haemonrhagicum, а на 7-й день - желтое тело. У другой крольчихи, получавшей грязевые процедуры, такие же явления были менее демонстративны, так как кровяной пункт образовался на задней поверхности пересаженного яичника. У крольчихи, получавшей только грелку, так же как и у контрольной, не получавшей никаких процедур, таких явлений в пересаженных яичниках не наблюдалось. На основании результатов своего эксперимента Живатов пришел к заключению, что «в грязи имеется проланоподобное вещество и что из грязи всосалось кожей не менее 20 м. е. этого вещества».
Трансплантированный в переднюю камеру глаза яичник, конечно, может служить тест-объектом для пролана. Такая проба является вариантом биологической реакции. При постановке пробы на крольчихах необходимо принять во внимание, что как у инфантильных, так и особенно у половозрелых крольчих точечные кровоизлияния в яичнике могут возникнуть не только под влиянием покрытия или введения пролана, но иногда внезапно под влиянием внешних причин. Вот почему считают, что для теста на продан более подходят неполовозрелые крысы и мыши, так как у них точечные кровоизлияния внезапно никогда не появляются. В эксперименте Живатова и Землинской нельзя исключить наличие внешних резких раздражений крольчих при получении ряда грязевых процедур. Положительный результат получен был всего только в двух случаях, из которых один недостаточно демонстративен. Для вывода определенного заключения такой материал нельзя считать достаточным. Обстоятельством, вызывающим сомнения и возражения, является также известный факт невозможности пролана проникать через кожу, вследствие чего он не нашел применения в виде мазей. Для доказательства наличия в грязях проланоподобных веществ необходимо выделить их из грязи и полученным экстрактом вызвать точечные кровоизлияния в яичнике инфантильной мыши. Основанные на методологически невыдержанных экспериментах и теоретических установках выводы Живатова, к сожалению, включены без каких-либо критических замечаний в недавно выпущенное в свет руководство для врачей А. М. Мажбица, которое к тому же содержит еще ряд неточностей в главе «Эндокринная теория действия грязелечения». Отдельно следует остановиться на результатах испытаний действия водного экстракта из грязи на окраску покровов нормальной лягушки. Гринфельд, как я уже сообщил, при впрыскивании такого экстракта негипофизэктомированным лягушкам получал побледнение их покровов. Давно обращали внимание на то, что адреналин вызывает резкое сокращение меланинсодержащих пигментных клеток. В результате опытов на аксолотлях Воронцова рассматривала действие адреналина на контракцию меланофор как специфичное. Ссылаясь на то, что Мандельштам и Дыхно наблюдали побледнение покровов у нормальных лягушек под действием адреналина, Живатов высказывает предположение, что в водном экстракте из грязи имеются адреналиноподобные вещества или что содержащееся, по его мнению, в водном экстракте проланоподобное вещество обладает свойством стимуляции надпочечников. С целью испытания водных вытяжек из грязи на меланофорную реакцию и на адреналиноподобные вещества мной в лаборатории Института экспериментального морфогенеза совместно с М. А. Воронцовой были поставлены следующие опыты (1940). Предварительно в биохимическом отделе Государственного института экспериментальной эндокринологии были получены водные вытяжки из сакской и мойнакской грязи. 600 г грязи смешивали с 6 л дестиллированнои воды, затем встряхивали в течение 6 часов в специальном аппарате. После фильтрования в полученных водных вытяжках из сакской и мойнакской грязи было определено содержание хлоридов; при этом в вытяжке из сакской грязи оказалось 0,76% хлоридов, а в вытяжке из мойнакской грязи - 0,81%. Биологическое испытание на присутствие в вытяжках веществ, вызывающих меланофорную реакцию, произведено было на семимесячных аксолотлях, подвергнутых за два дня до опыта гипофизэктомии. Введение 5 см3 водных вытяжек как из сакской, так и из мойнакской грязи в брюшную полость гипофизэктомированных аксолотлей, находящихся в первой стадии депигментации, не вызвало потемнения покровов на протяжении нескольких часов после начала опыта, точно так же как и у контрольных гипофизэктомированных аксолотлей, которым был впрыснут физиологический раствор в том же количестве. Другой опыт был поставлен с теми же вытяжками на нормальных аксолотлях для выяснения присутствия в вытяжках адреналиноподобных веществ. Введение 5 см3 водной вытяжки как из сакской, так и из мойнакской грязи в брюшную полость нормальных аксолотлей на протяжении нескольких часов не вызвало побледнения их покровов, точно так же как и у контрольных нормальных аксолотлей, которым было впрыснуто такое же количество физиологического раствора. Таким образом, в наших опытах на аксолотлях, чрезвычайно чувствительных к меланофорной реакции и к адреналиновой пробе, не удалось получить подтверждения о наличии в грязях веществ, подобных меланофорному гормону и адреналиноподобных. В дополнение поставлены были опыты на присутствие в грязях адреналиноподобных веществ при помощи биологической пробы на кровяном давлении у кролика, которая, как известно, чрезвычайно чувствительна даже при малых концентрациях адреналина, например, при разведении 1 : 1 000 000. В биохимическом отделе Всесоюзного института экспериментальной эндокринологии были приготовлены вытяжки из сакской и мойнакской иловой грязи. Для этой цели к 50 г грязи прибавляли 50 см3 дестиллированнои воды; после энергичного встряхивания на шюттель-аппарате в течение 3 часов смесь фильтровали на складчатом фильтре. Прозрачный бесцветный фильтрат служил исходным материалом для биологического испытания, которое производилось в отделе фармакологии Всесоюзного института экспериментальной эндокринологии. После введения в вену кролика 0,5-1 см3 водной вытяжки как из сакской, так и из мойнакской грязи не было зарегистрировано никакого повышения кровяного давления. Таким образом, при помощи весьма чувствительной пробы нам не удалось обнаружить адреналиноподобных веществ в иловых грязях Сакского и Мойнакокого озер. Однако в литературе встречаются указания, что под влиянием грязевой процедуры содержание адреналина в крови повышается. Высокий уровень адреналина в крови рассматривали как выражение раздражения надпочечников нагреванием. Какие же выводы можно сделать по отношению к гормоноподобным веществам лечебных грязей на основании результатов собственных исследований и опубликованых материалов других авторов? Прежде всего следует признать доказанным, что имеющие широкое лечебное применение торфяные, иловые и сапропелевые грязи содержат эстрогенные вещества, по биологическому действию подобные фолликулярному гормону. Эти эстрогенные вещества своим происхождением обязаны присутствию в грязях животных и растительных организмов в состоянии их разложения или жизнедеятельности.
Химическое строение содержащихся в грязях эстрогенных веществ пока не выяснено; это должно быть предметом последующих специальных исследований. Во время грязелечебных процедур не исключена возможность проникновения через кожу или через стенку влагалища содержащихся в грязях эстрогенных веществ, которые могут вызывать в организме свойственные им ответные реакции и тем оказывать специфическое действие на половую систему, приводящее к активизирующему ее функции лечебному эффекту. В то же время при пользовании грязевыми процедурами нельзя не учитывать многообразных влияний других получивших признание физико-химических факторов неспецифического характера, которые, с одной стороны, могут сами по себе вызывать в половой системе специфические реакции, а с другой - способны усиливать восприятие воздействия специфического эстрогенного фактора грязей. Эстрогенная активность различных образцов грязи одного и того же месторождения количественно может значительно колебаться, а потому для исследования каждого месторождения необходимо брать образцы грязи из ряда участков и слоев залегания грязевой массы, в разное время года, из различных бассейнов, при неодинаковых условиях хранения грязи, с тем чтобы грязь, в которой окажется наибольшее содержание эстрогенных веществ, использовать для лечения женщин с гипогенитальными расстройствами. Сравнение эстрогенной активности исследованных грязей может иметь только приблизительный характер вследствие неоднородности применявшейся методики экстрагирования. В настоящее время для получения более подробной характеристики грязи того или иного месторождения следует выяснить ее эстрогенную активность.
Подробно изложенная нами методика алкогольной экстракции эстрогенных веществ из грязей доступна для практического использования на многих грязевых курортах. В случае невозможности осуществления на курорте биологической проверки полученные там алкогольные экстракты можно направлять в центральные лаборатории, располагающие возможностями биологического или колориметрического определения количественного содержания эстрогенных веществ. Относительно присутствия в грязях веществ, подобных по действию мужскому половому гормону, пока нельзя сделать определенного заключения, однако факт нахождения таковых в одном случае должен побудить к дальнейшим исследованиям в этом направлении. Нет достаточных оснований для признания присутствия в грязях веществ, по действию подобных гипофизарным гормонам: тонадотропному (пролану), меланофорному и адреналотропному.
Популярные статьи сайта из раздела «Медицина и здоровье»
.
Поможет ли имбирь сбросить лишний вес?
Не столь давно в качестве лучшего средства борьбы с лишним весом преподносился ананас, теперь пришла очередь имбиря. Можно ли похудеть с его помощью или это разбитые надежды худеющих?
Чего только не пробуют желающие расстаться с ненавистными килограммами - обертывания, травяные настои, экзотические продукты. Можно ли похудеть с помощью пищевой соды?
Далеко не все рекламируемые средства действительно помогают сбросить вес, но абсолютно все они клянутся помочь. Сегодня на пике популярности находится зеленый кофе. Что же в нем особенного?
Метод клеточной терапии применяется для коррекции возрастных изменений в организме. Но как же работает клеточная терапия? И действительно ли эффективна клеточная косметика?
Достаточно ясные образы из сна производят неизгладимое впечатление на проснувшегося человека. Если через какое-то время события во сне воплощаются наяву, то люди убеждаются в том, что данный сон был вещим. Вещие сны отличаются от обычных тем, что они, за редким исключением, имеют прямое значение. Вещий сон всегда яркий, запоминающийся...
Существует стойкое убеждение, что сны про умерших людей не относятся к жанру ужасов, а, напротив, часто являются вещими снами. Так, например, стоит прислушиваться к словам покойников, потому что все они как правило являются прямыми и правдивыми, в отличие от иносказаний, которые произносят другие персонажи наших сновидений...
Если приснился какой-то плохой сон, то он запоминается почти всем и не выходит из головы длительное время. Часто человека пугает даже не столько само содержимое сновидения, а его последствия, ведь большинство из нас верит, что сны мы видим совсем не напрасно. Как выяснили ученые, плохой сон чаще всего снится человеку уже под самое утро...
Приворот является магическим воздействием на человека помимо его воли. Принято различать два вида приворота – любовный и сексуальный. Чем же они отличаются между собой?
По данным статистики, наши соотечественницы ежегодно тратят баснословные суммы денег на экстрасенсов, гадалок. Воистину, вера в силу слова огромна. Но оправдана ли она?
Порча насылается на человека намеренно, при этом считается, что она действует на биоэнергетику жертвы. Наиболее уязвимыми являются дети, беременные и кормящие женщины.
Испокон веков люди пытались приворожить любимого человека и делали это с помощью магии. Существуют готовые рецепты приворотов, но надежнее обратиться к магу.
При выборе имени для ребенка необходимо обращать внимание на сочетание выбранного имени и отчества. Предлагаем вам несколько практических советов и рекомендаций.
Хорошее сочетание имени и фамилии играет заметную роль для формирования комфортного существования и счастливой судьбы каждого из нас. Как же его добиться?
Еще недавно многие полагали, что брак по расчету - это архаический пережиток прошлого. Тем не менее, этот вид брака благополучно существует и в наши дни.
Очевидно, что уход за собой необходим любой девушке и женщине в любом возрасте. Но в чем он должен заключаться? С чего начать?
Представляем вам примерный список процедур по уходу за собой в домашних условиях, который вы можете взять за основу и переделать непосредственно под себя.
Та-а-а-к… Повеселилась вчера на дружеской вечеринке… а сегодня из зеркала смотрит на меня незнакомая тётя: убедительные круги под глазами, синева, а первые морщинки
просто кричат о моём биологическом возрасте всем окружающим. Выход один – маскироваться!
Нанесение косметических масок для кожи - одна из самых популярных и эффективных процедур, заметно улучшающая состояние кожных покровов и позволяющая насытить кожу лица необходимыми витаминами. Приготовление масок занимает буквально несколько минут!
Каждая женщина в состоянии выглядеть исключительно стильно, тратя на обновление своего гардероба вполне посильные суммы. И добиться этого совсем несложно – достаточно следовать нескольким простым правилам.
С давних времен и до наших дней люди верят в магическую силу камней, в то, что энергия камня сможет защитить от опасности, поможет человеку быть здоровым и счастливым.
Для выбора амулета не очень важно, соответствует ли минерал нужному знаку Зодиака его владельца. Тут дело совершенно в другом.
© Все права на статьи принадлежат авторам сайта, если не указано иное.
16 +